一、非洲豬瘟變異株的定義

非洲豬瘟變異株包括基因缺失株、自然變異株、自然弱毒株等，與2018年傳入的非洲豬瘟毒株相比，該類毒株的基因組序列、致病力等發(fā)生明顯變化。生豬感染該類毒株后，潛伏期延長，臨床表現(xiàn)輕微，后期可出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹、皮膚出血型壞死灶，感染母豬產(chǎn)仔性能下降、死淘率增高，出現(xiàn)流產(chǎn)死胎/木乃伊胎等。與傳統(tǒng)的流行毒株相比，生豬感染該類毒株后排毒滴度低、間隙性排毒，難以早期發(fā)現(xiàn)。

二、監(jiān)測方法

（一）加強臨床巡視

時刻關(guān)注豬場各個環(huán)節(jié)豬只異常情況，想方設(shè)法提升飼養(yǎng)人員責(zé)任心，一旦發(fā)現(xiàn)豬只出現(xiàn)嗜睡、輕觸不起、采食量減少，發(fā)熱、皮膚發(fā)紅、關(guān)節(jié)腫脹/壞死、咳喘、腹式呼吸，育肥豬死淘率增高，母豬流產(chǎn)或出現(xiàn)死胎/木乃伊胎等可疑臨床表現(xiàn)時，應(yīng)第一時間采樣檢測。

（二）改進主動監(jiān)測

每周對豬群進行病原和抗體檢測。在豬群進行疫苗接種、轉(zhuǎn)群、去勢，或母豬分娩后，應(yīng)進行采樣檢測。豬場出現(xiàn)風(fēng)險暴露或周邊豬場出現(xiàn)感染時，按需進行采樣檢測。

（三）抽樣策略

對可疑豬的同舍和關(guān)聯(lián)舍豬群，采集深部咽拭子和抗凝血，進行病原檢測，必要時采集血清進行抗體檢測。對可疑豬及臨近豬接觸的地面、欄桿，以及舍內(nèi)人員接觸的物品等，采集環(huán)境樣品進行病原檢測。病原檢測如果混檢，建議混樣數(shù)量不超過5個；抗體檢測不得混樣。

（四）樣品選擇

1. 對可疑豬，按檢出概率高低排序，依次采集深部咽拭子、前腔靜脈抗凝血（EDTA）或尾根血、口鼻拭子。

2. 對分娩母豬，應(yīng)采集臍帶血、胎衣；對死胎和流產(chǎn)胎兒，應(yīng)采集淋巴結(jié)、脾臟等組織樣品。

3. 對病死豬，優(yōu)選采集部位為淋巴結(jié)、脾臟、骨髓和肺臟。

4. 血清樣本，按常規(guī)方法制備。

三、檢測方法及配套

（一）采樣

豬場用戶在進行環(huán)境樣監(jiān)測或者群體普查時，可在采樣時使用快靈的軟拭子和多腔體病毒采樣管進行高效采樣及混樣。

軟拭子頭部具有彈性，彈性絨毛拭子頭較容易彎曲來適應(yīng)豬場不同的異性部位，增大采樣接觸面積，其面積比普通紡錘形拭子多2-3倍，能更多采集目標(biāo)樣品。

多腔體采樣管不同于市面上傳統(tǒng)的采樣管，其內(nèi)部結(jié)構(gòu)分別為洗滌腔及擠存腔，洗滌腔體內(nèi)設(shè)有多個豎向刮擦片，對進入腔體中旋轉(zhuǎn)的拭子進行接觸刮擦，幫助絨毛表面的樣品洗脫釋放。多個擠存錢腔可以最多十根軟拭子，釋放了樣本后將拭子插入洗滌腔上部的擠壓腔，可將彈性植絨拭子吸附的洗脫液擠壓出來并從縫隙部位回流到洗滌腔。相比傳統(tǒng)采樣管，僅用少于1/5容積的液體就能充分對拭子樣品進行洗滌，能直接提高采樣溶液病原濃度達5-6倍。

（二）病原檢測方法

原則上參照“農(nóng)辦牧〔2020〕39號”附件《非洲豬瘟病毒流行株與基因缺失株鑒別檢測規(guī)范》。

對采集的樣本進行核酸提取，可選用快靈的手動柱法提取試劑盒，樣本量太大可使用快靈磁珠提取試劑盒。

擴增時建議選用快靈ASFV流行株/基因缺失變異株鑒別試劑盒，即P72/MGF/CD2V鑒別試劑盒（下稱鑒別試劑盒），為了適配不同客戶的不同儀器，快靈鑒別試劑盒在標(biāo)準(zhǔn)試劑盒的基礎(chǔ)上進行部分優(yōu)化，僅涉及檢測項目，試劑盒靈敏度、特異性等基本功能保持一致，方便客戶根據(jù)不同的需求進行選擇。不同試劑盒性能見表1：

表1：不同鑒別試劑盒性能說明

（三）抗體檢測方法  采用間接ELISA、阻斷ELISA等方法檢測抗體水平，詳見《非洲豬瘟診斷技術(shù)》（GB/T 18648）

抗體檢測的意義對于急性疾病的爆發(fā)，病毒檢測（PCR）最有用，血清學(xué)診斷價值較低，因為感染的豬大多數(shù)在抗體產(chǎn)生之前死亡；非洲豬瘟變異株（包括基因缺失株、自然變異株、自然弱毒株等）的出現(xiàn)，生豬感染該類毒株后，潛伏期延長，臨床表現(xiàn)輕微，感染該類毒株后排毒滴度低、間隙性排毒，難以早期發(fā)現(xiàn)，因此抗體檢測的作用凸顯。如果沒有接種過疫苗，抗體的存在表明感染過非洲豬瘟病毒。上海快靈非洲豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒（間接法）系用大腸桿菌表達的非洲豬瘟病毒P30蛋白包被酶標(biāo)板，P30蛋白是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，在感染的早期表達和分泌，可用于感染后免疫反應(yīng)的的早期檢測。

ELISA抗體檢測原理 ELISA試劑盒是根據(jù)固相酶聯(lián)免疫吸附試驗設(shè)計而成的。在本檢測過程中，樣本暴露于包被在微量板孔內(nèi)的非感染性非洲豬瘟抗原。非洲豬瘟抗體（如果檢測樣本中存在）則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有非洲豬瘟抗體。

上海快靈非洲豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒（間接法）使用便捷、快速、敏感性高、特異性強，是理想的非洲豬瘟病毒抗體測工具。